Вирусы, вызывающие гибель (лизис) инфицированных бактерий, известны как литические бактериофаги (фаги). Так называемые умеренные бактериофаги встраивают собственную ДНК в хромосому бактерии. Синтез вирус-специфических белков и нуклеиновых кислот у таких фагов подавлен специфическим репрессором, поэтому бактерия не погибает и становится «иммунной» к повторному заражению (лизогения). Ассоциация фаговой ДНК с геномом бактерии способна качественно изменять антигенные или морфологические свойства бактериальной клетки, обуславливать синтез факторов вирулентности (лизогенная конверсия). ДНК умеренных вирусов реплицируется синхронно с размножением лизогенной бактерии, но иногда (примерно в одной из 102–105 подобных бактерий) фаг начинает спонтанно размножаться и лизировать клетку. Размножаясь в клетке, некоторые умеренные бактериофаги способны захватывать гены бактерии и, инфицируя другие клетки, передавать гены новому хозяину (трансдукция).


ансдуцирующие фаги переносят только бактериальную ДНК (общая трансдукция) или вирусную ДНК, участок которой замещен на бактериальную ДНК (специфическая трансдукция). Такие фаги не способны образовывать дочерние популяции, т. е. являются дефектными. Дефектные фаги используют в генной инженерии в качестве векторов. Исследования на бактериофагах позволили разрешить ряд важнейших проблем молекулярной биологии и молекулярной генетики. На модели бактериофагов было доказано, что материальным носителем наследственности является ДНК; были открыты феномены модификации-рестрикции, транскрипции; проведены исследования по изучению репликации, рекомбинации, морфогенезу. В основу классификации фагов положены антигенная структура, морфология фагов, спектр действия, химический состав и др. Большинство фагов относится к ДНК-содержащим вирусам с нуклео-капсидом, организованным по принципу смешанной симметрии. По спектру действия выделяют типовые фаги (Т-фаги), лизирующие бактерии отдельных типов внутри вида; моновалентные фаги, лизирующие бактерии одного вида; и поливалентные фаги, лизирующие бактерии нескольких видов.

Бактериофаг phi29 обладает сложной системой для упаковки ДНК в капсид. Этот хорошо изученный наномотор можно химически и генетически модифицировать для того, чтобы встроить его в липосомальную мембрану и использовать в системах доставки лекарственных средств для их контролируемого высвобождения в патологическом очаге. На основе массивов из модифицированных наномоторов, распознающих различные биомаркеры, разрабатываются чувствительные сенсоры для in vitro диагностики.


Бактериофаги (их капсиды), так же как и другие вирусы, могут быть использованы как строительные леса, задающие определенное пространственное расположение небиогенным наночастицам. Подобные «строительные леса» позволяют не только создавать планарные структуры определенной формы и размера, но и перейти к проектированию и созданию трехмерных наноконструкций, таких сложных, как тетраэдр или сфера. В результате могут быть получены наноструктуры или материалы с новыми полезными свойствами для применения в самых различных областях нанотехнологий.

Источник: thesaurus.rusnano.com

Действие бактериофагов

Очень важным является то, что бактериофаги не трогают не «свои» бактерии, поэтому не вызывают гибель «хорошей» микрофлоры и, конечно, абсолютно безопасны для клеток высших организмов, включая человека.

При фаготерапии отсутствуют побочные эффекты, такие как аллергия, дисбактериоз, вторичные инфекции (например, грибковые), что нередко наблюдается при приеме антибиотиков. Бактериофаги могут применяться в комбинированной терапии с любыми лекарственными препаратами, включая антибиотики.

fag_action.jpg


Препараты бактериофагов представляют собой раствор, используют их либо местно (например, на кожу или слизистые), либо принимают внутрь. В организме бактериофаги концентрируются в местах наибольшего поражения и размножаются до тех пор, пока находят бактерии-«мишени». После того, как бактерии-«мишени» закончились, фаги выводятся из организма.

Главная цель фаготерапии – остановить и повернуть вспять инфекционный процесс, чтобы дать иммунной системе организма возможность справиться с болезнью.

С помощью бактериофагов лечат:

Бактериофаг рисунок
инфекции мочеполовой системы

icon_2.png
инфекции органов дыхания

icon_3.png
инфекции желудочно-кишечного тракта

icon_4.png
ожоговые и раневые инфекции

iv>
icon_5.png
трофические язвы

icon_6.png
остеомиелит

icon_8.png
гнойно-воспалительные заболевания кожи и слизистых;
icon_7.png
внутрибольничные инфекции

В идеальном случае перед началом лечения у конкретного больного следует выделить болезнетворную бактерию в культуру и подобрать бактериофаг из «коллекции» уже известных бактериальных вирусов.

Препараты бактериофагов трудно поддаются стандартизации из-за специфики производства — даже опытный специалист не всегда может заранее предсказать эффективность того или иного препарата у конкретного пациента, так как разные бактериальные штаммы бактерий могут вызывать схожие проявления болезни. Выход – производство «коктейлей» из фагов, способных убивать разные штаммы и даже виды возбудителей. И такие препараты уже существуют: пиобактериофаги поливалентные или комплексные.


Источник: www.bacteriofag.ru

Бактериофаги – вирусы бактерий. Они состоят из головки, имеющей кубическую симметрию, и отростка или «хвоста» со спиральной симметрией. На конце отростка имеется Базальная пластина с шипами и щупальцами, предназначенными для закрепления на стенке бактериальной клетки. Нуклеиновая кислота (чаще всего ДНК) находится в полиэдрической головке. Выделяют два типа жизнедеятельности бактериофагов: Умеренный и вирулентный.

Жизненный цикл Вирулентного бактериофага состоит из следующих этапов:

1.Абсорбция – закрепление на стенке бактерии с помощью шипов и щупалец базальной пластины.

2. Инъекция – впрыскивание фаговой ДНК внутрь бактериальной клетки. Чехол отростка сокращается, давление внутри фаговой частицы увеличивается и ДНК инъецируется в бактериальную клетку, а капсид остается за пределами клетки.

3. Встраивание в нуклеоид клеткиХозяина.

4. Многократное самокопирование фаговой ДНК.

5. Регенерация капсида.

6. Созревание (сборка) фаговых частиц Может происходить спонтанно, без участия специальных факторов в результате агрегации НК и капсидных белков.

>

7. Лизис клетки и выход бактериофагов происходит тогда, когда

Концентрация фагов в клетке достигает критического уровня,

Например, когда накапливается 10 000 вирусных частиц на клетку .

Такой цикл еще называют Литическим.

Умеренные бактериофаги В жизненном цикле проходят три первых этапа (абсорбция, инъекция, встраивание в нуклеоид), а затем реплицируются синхронно с хромосомой бактерии. Это явление называется Лизогенией. Через несколько поколений под влиянием условий внешней среды (УФ, рентгеновское излучение) вирусный геном может перейти из умеренной формы в вирулентную и вызвать лизис всех инфицированных клеток. В другом случае ДНК бактериофага может выйти из состава нуклеоида и покинуть клетку, «прихватив с собой» часть ДНК хозяина. Эта генетическая информация переносится фагом в другую бактериальную клетку. Это явление называется Трансдукцией.

Жизненный цикл бактериофага

 

Рис. 18. Жизненный цикл бактериофага

Источник: veterinarua.ru

История

Английский бактериолог Туорт, Фредерик
в статье 1915 года описал инфекционную болезнь стафилококков,
инфицирующий агент проходил через фильтры, и его можно было переносить
от одной колонии к другой.


Независимо от Фредерика Туорта французско-канадский микробиолог Д’Эрель, Феликс 3 сентября 1917 год сообщил об открытии бактериофагов. Наряду с этим известно, что российский микробиолог Гамалея, Николай Фёдорович ещё в 1898 году, впервые наблюдал явление лизиса бактерий (сибиреязвенной палочки) под влиянием перевиваемого агента [1][2].

После открытия явлений бактериофагии Д’Эрелль развил учение о том,
что бактериофаги патогенных бактерий, являясь их паразитами, играют
большую роль в патогенезе инфекций, обеспечивая выздоровление больного
организма, а затем создания специфического иммунитета. Это положение
привлекло к явлению бактериофагии внимание многих исследователей,
которые предполагали найти в фагах важное средство борьбы с наиболее
опасными инфекционными болезнями человека и животных.

Также Феликс Д’Эрель выдвинул предположение, что бактериофаги имеют
корпускулярную природу. Однако только после изобретения электронного микроскопа
удалось увидеть и изучить ультраструктуру фагов. Долгое время
представления о морфологии и основных особенностях фагов основывались на
результатах изучения фагов Т-группы — Т1, Т2,…, Т7, которые
размножаются на Е. coli штамма
B. Однако с каждым годом появлялись новые данные, касающиеся морфологии
и структуры разнообразных фагов, что обусловило необходимость их
морфологической классификации.

Роль бактериофагов в биосфере


Бактериофаги представляют собой наиболее многочисленную, широко
распространенную в биосфере и, предположительно, наиболее эволюционно
древнюю группу вирусов [3][4]. Приблизительный размер популяции фагов составляет более 1030 фаговых частиц[5].

В природных условиях фаги встречаются в тех местах, где есть
чувствительные к ним бактерии. Чем богаче тот или иной субстрат (почва,
выделения человека и животных, вода и т. д.) микроорганизмами, тем в
большем количестве в нём встречаются соответствующие фаги. Так, фаги,
лизирующие клетки всех видов почвенных микроорганизмов, находятся в
почвах. Особенно богаты фагами черноземы и почвы, в которые вносились
органические удобрения.

Бактериофаги выполняют важную роль в контроле численности микробных
популяций, в автолизе стареющих клеток, в переносе бактериальных генов,
выступая в качестве векторных «систем»[6].

Действительно, бактериофаги представляют собой один из основных подвижных генетических элементов. Посредством трансдукции они привносят в бактериальный геном новые гены. Было подсчитано, что за 1 секунду могут быть инфицированы 1024 бактерий [7]. Это означает, что постоянный перенос генетического материала распределяется между бактериями, обитающими в сходных условиях.


Высокий уровень специализации, долгосрочное существование,
способность быстро репродуцироваться в соответствующем хозяине
способствует их сохранению в динамичном балансе среди широкого
разнообразия видов бактерий в любой природной экосистеме. Когда
подходящий хозяин отсутствует, многие фаги могут сохранять способность к
инфицированию на протяжении десятилетий, если не будут уничтожены
экстремальными веществами либо условиями внешней среды [8].

Строение бактериофагов

Бактериофаги различаются по химической структуре, типу нуклеиновой
кислоты, морфологии и характеру взаимодействия с бактериями. По размеру
бактериальные вирусы в сотни и тысячи раз меньше микробных клеток.

Типичная фаговая частица (вирион) состоит из головки и хвоста. Длина
хвоста обычно в 2 — 4 раза больше диаметра головки. В головке содержится
генетический материал — одноцепочечная или двуцепочечная РНК или ДНК с ферментом транскриптазой в неактивном состоянии, окруженная белковой или липопротеиновой оболочкой — капсидом, сохраняющим геном вне клетки [9].


Нуклеиновая кислота и капсид вместе составляют нуклеокапсид. Бактериофаги могут иметь икосаэдральный капсид, собранный из множества копий одного или двух специфичных белков. Обычно углы состоят из пентамеров
белка, а опора каждой стороны из гексамеров того же или сходного белка.
Более того, фаги по форме могут быть сферические, лимоновидные или
плеоморфные [10].
Хвост представляет собой белковую трубку — продолжение белковой
оболочки головки, в основании хвоста имеется АТФаза, которая
регенерирует энергию для инъекции генетического материала. Существуют
также бактериофаги с коротким отростком, не имеющие отростка и
нитевидные [11].

Фаги, как и все вирусы, являются абсолютными внутриклеточными
паразитами. Хотя они переносят всю информацию для запуска собственной
репродукции в соответствующем хозяине, у них отсутствуют механизмы для
выработки энергии и рибосомы для синтеза белка. У некоторых фагов в
геноме содержится несколько тысяч оснований, тогда как фаг G, самый
крупный из секвенированных фагов, содержит 480 000 пар оснований — вдвое
больше среднего значения для бактерий, хотя всё же недостаточного
количества генов для важнейшего бактериального органоида как рибосомы.

Систематика бактериофагов

Большое количество выделенных и изученных бактериофагов определяет
необходимость их систематизации. Классификация вирусов бактерий
претерпевала изменения: основывалась на характеристике хозяина вируса,
учитывались серологические, морфологические свойства, а затем строение и
физико-химический состав вириона [12].

В настоящее время согласно Международной классификации и номенклатуре
вирусов бактериофаги, в зависимости от типа нуклеиновой кислоты
разделяют на ДНК- и РНК- содержащие.

По морфологическим характеристикам ДНК-содержащие фаги выделены в
следующие семейства: Myoviridae, Siphoviridae, Podoviridae,
Lipothrixviridae, Plasmaviridae, Corticoviridae, Fuselloviridae,
Tectiviridae, Microviridae, Inoviridae Plectovirus и Inoviridae
Inovirus.

РНК-содержащие: Cystoviridae, Leviviridae [13].

Взаимодействие бактериофага с бактериальными клетками

По характеру взаимодействия бактериофага с бактериальной клеткой
различают вирулентные и умеренные фаги [11]. Вирулентные фаги могут
только увеличиваться в количестве посредством литического цикла [8].
Процесс взаимодействия вирулентного бактериофага с клеткой складывается
из нескольких стадий: адсорбции бактериофага на клетке, проникновения в
клетку, биосинтеза компонентов фага и их сборки, выхода бактериофагов из
клетки [7][14].

Первоначально бактериофаги прикрепляются к фагоспецифическим
рецепторам на поверхности бактериальной клетки. Хвост фага с помощью
ферментов, находящихся на его конце (в основном лизоцима), локально
растворяет оболочку клетки, сокращается и содержащаяся в головке ДНК
инъецируется в клетку, при этом белковая оболочка бактериофага остается
снаружи. Инъецированная ДНК вызывает полную перестройку метаболизма
клетки: прекращается синтез бактериальной ДНК, РНК и белков. ДНК
бактериофага начинает транскрибироваться с помощью собственного фермента
транскриптазы, который после попадания в бактериальную клетку
активируется. Синтезируются сначала ранние, а затем поздние иРНК,
которые поступают на рибосомы клетки-хозяина, где синтезируются ранние
(ДНК-полимеразы, нуклеазы) и поздние (белки капсида и хвостового
отростка, ферменты лизоцим, АТФаза и транскриптаза) белки бактериофага.
Репликация ДНК бактериофага происходит по полуконсервативному механизму и
осуществляется с участием собственных ДНК-полимераз. После синтеза
поздних белков и завершения репликации ДНК наступает заключительный
процесс — созревание фаговых частиц или соединение фаговой ДНК с белком
оболочки и образование зрелых инфекционных фаговых частиц [15].

Продолжительность этого процесса может составлять от нескольких минут
до нескольких часов [8]. Затем происходит лизис клетки, и освобождаются
новые зрелые бактериофаги [11]. Иногда фаг инициирует лизирующий цикл,
что приводит к лизису клетки и освобождению новых фагов. В качестве
альтернативы фаг может инициировать лизогенный цикл, при котором он
вместо репликации обратимо взаимодействует с генетической системой
клетки-хозяина, интегрируясь в хромосому или сохраняясь в виде плазмиды
[8]. Таким образом, вирусный геном реплицируется синхронно с ДНК хозяина
и делением клетки, а подобное состояние фага называется профагом.
Бактерия, содержащая профаг, становится лизогенной до тех пор, пока при
определенных условиях или спонтанно профаг не будет стимулирован на
осуществление лизирующего цикла репликации. Переход от лизогении к
лизису называется лизогенной индукцией или индукцией профага. На
индукцию фага оказывает сильное воздействие состояние клетки хозяина
предшествующее индукции, также как наличие питательных веществ и другие
условия, имеющие место быть в момент индукции. Скудные условия для роста
способствуют лизогенному пути, тогда как хорошие условия способствуют
лизирующей реакции [8, 11, 15].

Очень важным свойством бактериофагов является их специфичность:
бактериофаги лизируют культуры определенного вида, более того,
существуют так называемые типовые бактериофаги, лизирующие варианты
внутри вида, хотя встречаются поливалентные бактериофаги, которые
паразитируют в бактериях разных видов [16][17].

Жизненный цикл

Умеренные и вирулентные бактериофаги на начальных этапах взаимодействия с бактериальной клеткой имеют одинаковый цикл.

  • Адсорбция бактериофага на фагоспецифических рецепторах клетки.
  • Инъекция фаговой нуклеиновой кислоты в клетку хозяина.
  • Совместная репликация фаговой и бактериальной нуклеиновой кислоты.
  • Деление клетки.
  • Далее бактериофаг может развиваться по двум моделям: лизогенный либо литический путь.
    Умеренные бактериофаги после деления клетки находятся в состоянии профага (Лизогенный путь).
    Вирулентные бактериофаги развиваются по Литической модели:
  • Нуклеиновая кислота фага направляет синтез ферментов фага, используя
    для этого белоксинтезирующий аппарат бактерии. Фаг тем или иным
    способом инактивирует ДНК и РНК хозяина, а ферменты фага совсем
    расщепляют её; РНК фага «подчиняет» себе клеточный аппарат синтеза
    белка.
  • Нуклеиновая кислота фага реплицируется, и направляет синтез новых
    белков оболочки. Образуются новые частицы фага в результате спонтанной
    самосборки белковой оболочки (капсид) вокруг фаговой нуклеиновой
    кислоты; под контролем РНК фага синтезируется лизоцим.
  • Лизис клетки: клетка лопается под воздействием лизоцима; высвобождается около 200—1000 новых фагов; фаги инфицируют другие бактерии.

Применение

В медицине

Одной из областей использования бактериофагов является антибактериальная терапия, альтернативная приёму антибиотиков. Например, применяются бактериофаги: стрептококковый, стафилококковый, клебсиеллёзный, дизентерийный поливалентный, пиобактериофаг, коли, протейный и колипротейный и другие.

Бактериофаги применяются также в генной инженерии в качестве векторов, переносящих участки ДНК, возможна также естественная передача генов между бактериями посредством некоторых фагов (трансдукция).

Фаговые векторы обычно создают на базе умеренного бактериофага λ,
содержащего двухцепочечную линейную молеклул ДНК. Левое и правое плечи
фага имеют все гены, необходимые для литического цикла (репликации,
размножения). Средняя часть генома бактериофага λ (содержит гены,
контролирующие лизогению, то есть его интеграцию в ДНК бактериальной
клетки) не существенна для его размножения и составляет примерно 25
тысяч пар нуклеотидов. Данная часть может быть заменена на чужеродный
фрагмент ДНК. Такие модифицированные фаги проходят литический цикл, но
лизогения не происходит. Векторы на основе бактериофага λ используют для
клонирования фрагментов ДНК эукариот (то есть более крупных генов)
размером до 23 т.п.н. Причем, фаги без вставок — менее 38 т.п.н или,
напротив, со слишком большими вставками — более 52 т.п.н не развиваются и
не поражают бактерии[18].

Источник: drevo-dobra.livejournal.com